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定慧寺巷是中國江蘇省蘇州古城東南部的一條東西向街道,西到鳳凰街,東到官太尉河,全長294米,寬11米,小方石路面,西口建有花崗石牌坊,箱內兩側建築為仿古風格。
定慧寺巷得名於巷內的定慧寺。文化大革命期間曾改名雙塔巷。
定慧寺巷內有定慧寺、羅漢院雙塔等古蹟。定慧寺巷南側原有王長河,1863年清軍入蘇州城後,在雙塔寺斬殺太平軍達2萬人,此河被人頭填平。