[1]限速酶（英語：rate-limiting enzyme）屬於代謝過程。不單獨指一種酶，有相對性。指在生物化學反應通路中催化反應速率最慢的酶，是限制總反應速度的酶，同時也決定了總反應速率。限速酶一般催化不可逆反應。
在糖酵解反應中，有三個限速酶：
- 己糖激酶，催化葡萄糖向葡萄糖-6-磷酸反應。
- 磷酸果糖激酶1，催化果糖-6-磷酸向果糖-1,6-二磷酸反應。
- 丙酮酸激酶，催化磷酸烯醇式丙酮酸向丙酮酸反應。
在三羧酸循環中，有三個限速酶：
- 檸檬酸合酶，催化草酰乙酸與乙酰輔酶a反應生成檸檬酸的反應。
- 異檸檬酸脫氫酶，催化異檸檬酸脫氫生成α酮戊二酸的反應。
- α-酮戊二酸脫氫酶，催化α-酮戊二酸脫氫生成琥珀酰輔酶a的反應。
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