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親和色譜法

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親和色譜法(英語:Affinity chromatography,又稱為親和層析)是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合能力的分子,並且它們的結合是可逆的,在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來去除或減少混合物中某一分子的含量。

原理

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利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力,進行選擇性分離。親和色譜常用的生物分子相互作用有[1]

配體類型 靶向分子
1 底物類似物
2 抗體 抗原
3 Lectin Polysaccharide
4 核酸 鹼基互補配對的核酸序列
5 激素 受體
6 親和素 生物素
7 鈣調素 鈣調素結合蛋白
8 Poly-A序列 帶有poly (U)的RNA序列
9 Glutathione GST fusion protein
10 Proteins A and G 免疫球蛋白
11 金屬離子 多種融合蛋白

一般流程

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親和色譜分離的通常是混合在溶液中的物質,比如細胞內容物培養基血漿等。待分離的分子在通過色譜柱時被固定相或介質上的基團捕獲,而溶液中其他的物質可以順利通過色譜柱。然後把固態的基質取出後洗脫,目標分子即刻被洗脫下來。如果分離的目的是去除溶液中某種分子,那麼只要分子能與介質結合即可,可以不必進行洗脫。

特殊用途

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列色譜

親和色譜的用途很廣泛,可以用來從細胞提取物中分離純化核酸蛋白質,還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性,這些特性使蛋白選擇性地與配體結合,從而達到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。

  1. ^ Kumar, Pranav. Biophysics and Molecular Biology. New Delhi: Pathfinder Publication. 2018: 11. ISBN 978-93-80473-15-4.